孢子丝菌病的初筛是靠临床丰富的经验，怀疑孢子丝菌病后可进行组织病理学检查以及真菌学检查，必要时做进一步的分子生物学检查。

一、典型临床表现

结合患者病史、流行区域、皮损沿淋巴管呈串珠状排列的结节、肉芽肿、溃疡等，容易考虑淋巴管型孢子丝菌病的诊断。皮肤固定型及播散型的损害形态多样，对有明确外伤史，临床表现不典型又久治不愈的炎性丘疹、结节、溃疡、疣状损害、肿瘤样损害且在疾病流行区的均应考虑本病。

二、真菌学检查

临床标本取病灶渗出液、脓液及痂皮、组织块等进行直接镜检涂片，革兰染色或ＰＡＳ染色，高倍镜下可见染色阳性的卵圆形或梭形小体，临床标本直接镜检常由于菌数少而阳性率低。真菌培养是诊断孢子丝菌病的金标准，观察菌落生长及显微镜下形态，符合孢子丝菌特点可确诊。孢子丝菌为双相性真菌，在沙氏培养基上室温培养为菌丝相生长，在脑心浸液血培养基上３７°Ｃ培养为酵母相。

三、组织病理学检查

孢子丝菌病组织病理特征性改变是混合性炎性细胞肉芽肿改变，可见典型的三区病变，中央为化脓区，由中性粒细胞及少量嗜酸性粒细胞构成；其外为结核样区，由组织细胞、上皮样细胞及少量的多核巨细胞构成；最外层为梅毒样区，由淋巴细胞及浆细胞构成。皮损内可见ＰＡＳ染色阳性的圆形或卵圆形孢子，有时可见星状体。组织病理学检查对诊断有重要意义。免疫组化诊断包括ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光法、直接免疫荧光法检测孢子丝菌，均显示有高度特异性及敏感性。

四、精制孢子丝菌素皮肤试验

０．１％精制孢子丝菌素０．１ｍＬ，前臂屈侧皮内注射，２４～４８ｈ观察局部反应，如出现０．５～１．０ｃｍ直径的红色斑丘疹为阳性，具有快速诊断参考价值。该方法在我国尚未广泛推广应用。五、分子生物学诊断及分型

１、限制性片段长度多态性分析研究者最初采用ＲＦＬＰ的方法对孢子丝菌的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行分型，ｍｔＤＮＡ具有母系遗传、拷贝数多、突变率高、极少发生重组等特性，在菌种鉴定基因分型中具有重要的研究意义。

２、随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）ＲＡＰＤ是指利用随机引物对基因组ＤＮＡ进行扩增，基因组中碱基的缺失、重排、插入或突变，会形成图谱条带的多态性。有学者认为菌株基因组的带型与地区来源相关，可能更适合于区域内的菌株型别鉴定。

３、RＤＮＡ序列分析ＩＴＳ区序列具有适合的保守性和可变性，使其作为进行真菌种间分类及种内分型最可靠方法之一。虽然利用ＩＴＳ区序列进行基因分型可靠性和分辨率均较好，但是测序所需时间较长，操作繁琐，并不适用于临床的分型研究工作。

４、钙调蛋白基因序列分析（ＣＡＬ）ＣＡＬ是目前对孢子丝菌分型应用最广泛的方法，ＣＡＬ基因大小约６８５个ｂｐ，其中不变位点４７４个，信息位点１８０个，非信息性位点３４个。有研究认为ＣＡＬ是一种对孢子丝菌诊断及分型敏感及特异性均高、操作简单的方法。