1、病原体检查

(1)直接镜检标本：以10%氢氧化钾或生理盐水制片，高倍镜下发现大量菌丝和孢子有诊断意义，对于双相型真菌，仅查到孢子可能是正常带菌，真菌性肠炎的6种常见病原多数情况下直接镜检即可鉴定，但孢子，菌丝和其他背景物质有时相互混淆，不易辨认。①菌丝和孢子：菌丝粗细一致，除毛霉菌外均有分隔，可见不同角度的分支，细胞质均匀，内含大小不等的颗粒，孢子多为圆形或卵圆形，多数大小一致，边缘整齐，可见细胞构造。②细胞壁：在氢氧化钾溶液处理的标本中，细胞壁常变宽，连接成弧状，类似菌丝，但无菌丝的构造。③石棉体：比菌丝更细，不分节，无菌丝颗粒。④植物纤维：未消化的食物残渣，边缘不整，无分支。⑤脂细胞：圆形，构造模糊，无细胞壁。⑥磷脂小球：大小不一，形状不整，无细胞构造。⑦氢氧化钾结晶：雪花样或珊瑚状，边缘呈锯齿形，折光性强。⑧小水疱：圆形，透亮，无细胞构造。

(2)染色镜检常用的染色方法：①革兰染色：适用于念珠菌，孢子，菌丝染成蓝色，但着色不均。②过碘酸锡夫染色(PA5)：真菌孢子，菌丝均染成红色。③丫啶橙染色：荧光显微镜下真菌孢子呈亮绿色。④吉姆萨染色和瑞特染色：适用于荚膜组织胞浆菌，染色前用甲醇固定，油镜下菌体染成红色，较小一端有出芽，菌体周围有一圈荚膜样结构，为此菌的细胞壁，通常菌体位于巨噬细胞或单核细胞内，少数位于细胞外。⑤乳酸酚棉蓝染色：适用于各种真菌培养涂片，菌体染成蓝色。

(3)真菌培养：粪标本直接镜检通常不容易确定菌种，需参考粪培养结果，观察菌落形态，再挑取菌落染色后镜检，常用沙保培养基和血琼脂培养基，对于双相型真菌还需在不同温度下(25℃或37℃)分别培养，以便观察其形态改变。①大培养：是鉴别真菌的主要方法之一，可观察菌落的生长情况，根据菌落的生长速度，形态，色泽等，初步判别菌种。A.试管斜面：用白金环刺破琼脂平面，分3点将标本接种于试管斜面培养基上，此法不易污染，但菌落较小。B.培养皿：分3点将标本接种于平皿培养基中央，倒置后放恒温箱中培养，每3天观察1次菌落生长情况。②小培养：将大培养中生长较好的菌落接种在玻片培养基上，培养1～3天后，在显微镜下观察菌体的特征。A.点片法：先将少许培养基成形于载玻片中央，再将菌种接种于培养基边缘，覆以盖玻片，置于有U形管的玻璃平皿中，培养后于不同时间取出镜下观察或染色镜检。B.压片法：将菌种接种在试管斜面或平皿培养基上，覆一盖玻片，以便菌体向盖玻片上生长，然后于适当时间取出置于载玻片上镜检。

2、组织病理学检查：有些真菌属于人肠道内正常菌群，如白念珠菌，且真菌污染问题广泛存在，所以粪标本病原学检查的诊断价值有限，有时需结合肠镜活检结果综合判断。

(1)曲菌感染的病理变化：具有诊断意义，包括：①炎症：急性渗出性炎症。②溃疡形成：由于曲菌侵犯血管，引起血管破坏，出现血栓和组织坏死;溃疡大小不一，形态各异，可深达肌层，底面粗糙不平，有脓性渗出。③肉芽肿：由上皮细胞和巨噬细胞组成，伴有中性粒细胞，淋巴细胞或浆细胞浸润。④化脓性改变：黏膜下小脓肿形成，大量中性粒细胞浸润，其中可见菌丝。

(2)病理切片中发现真菌孢子和菌丝，是侵袭性肠炎的直接证据，有肯定的诊断意义，染色方法包括：①过碘酸锡夫染色：真菌呈红色。②乌洛托品银染色：真菌呈黑色。③丫啶橙荧光染色：真菌呈黄色或红色荧光。

3、免疫学检查

(1)真菌菌素皮肤试验：用念珠菌，曲菌，组织胞浆菌，副球孢子菌等真菌的菌素或菌苗，按不同的稀释比例做皮肤过敏试验，48h后出现直径大于5mm硬结或红斑为阳性，对于诊断临床症状不典型的患者，有参考价值。

(2)血清抗原检测：病原真菌被人体吞噬细胞等处理降解后，细胞壁和细胞浆抗原游离于血循环中，未被清除者可经酶免疫法(EIA)，间接血凝试验，免疫印迹法等检测，加热休克蛋白属于真菌胞浆抗原，Walsh等对肿瘤并发侵袭型念珠菌病，于发病后24h内检测有50%阳性，特异性高达96%，又如用ElA法检测曲菌肠炎患者血清中的细胞壁抗原和能与刀豆素A结合的相关抗原，有早期诊断价值，定量检测抗原水平达100μg/ml时，可对真菌培养阴性者做出确诊。

(3)血清抗体检测：补体结合试验对诊断组织胞浆菌肠炎有一定价值，可参考皮肤试验结果综合判断以排除假阳性，间接荧光素标记抗体定量试验可用于诊断念珠菌肠炎，此外，尚有对流免疫电泳，乳胶凝集试验，ELA等常用方法，以后者最为敏感，但对于艾滋病等伴有免疫功能抑制的患者，抗体检测容易出现假阴性。

(4)猬集反应：念珠菌病患者血清内有一种猬集因子和抑制猬集现象的干扰物，前者可抑制由念珠菌在试管中的活力，血清猬集反应在正常人普遍存在，但感染念珠菌后，由于干扰物增多，猬集现象被抑制。