1、空腹血糖测定

禁食15小时，空腹血糖在2.78mmol/l以下者，可确诊为胰岛素瘤。对一些轻症病人，禁食可延长至24～48小时以上，以诱时发作。本病病人多在禁食15～36小时内出现低血糖症状，如果禁食60～72小时仍不发作，可排除胰岛素瘤。

2、胰岛素测定

测定病人的空腹或发作时周围静脉血胰岛素水平，是确诊为胰岛素瘤的直接依据。正常人空腹周围血胰岛素水平为5～30μu/ml，平均低于24μu/ml。本病病人不仅胰岛素水平显著升高，即使在低血糖状态下胰岛素水平仍然高，为本病最特异试验。

除了空腹测定外，还可在手术中经门静脉取血测定胰岛素，方法为：手术中在办理输葡萄糖液前用细针穿刺门静脉主干取血，测定血糖和胰岛素水平。如门静脉主干血的胰岛素大于100μu/ml时，应考虑有胰岛素瘤存在的可能，如胰岛素值大于200μu/ml，可诊断为胰岛素瘤。此法在诊断上的特异性优于周围静脉血所测定的结果；也可用于判断胰岛素瘤是否已切除完全。

3、空腹周围静脉血胰岛素浓度与葡萄糖浓度的比值(iri/g)诊断法

病人禁食15～72小时，再检测周围静脉血胰岛素和葡萄糖水平，并计算胰岛素(iri)和葡萄糖(g)比值。正常人iri/g小于0.3；如大于0.3可诊断胰岛素瘤。本方法比单独测定胰岛素或血糖更为准确。

4、甲磺丁脲激发试验

甲磺丁脲可刺激胰岛释放胰岛素，产生持续3～5小时的低血糖。

(1)静脉法：早晨空腹抽血测血糖后，静脉注射甲磺丁脲(20～25mg/kg体重，溶于20ml生理盐水中)，于注射后5、15、30、45、60分钟各测血糖1次，第2、3小时每半小时测血糖1次，观察血糖变化。正常人在用药后半小时血糖达最低值，1.5～2小时恢复正常。胰岛素瘤病人注药后5～15分钟出现明显低血糖，且2～3小时后低血糖仍不恢复。

(2)口服法：口服甲磺丁脲和碳酸氢钠各2g，然后每半小时测血糖1次，连续5小时。正常人于服药后1～3小时内血糖达最低值；胰岛素瘤病人可早期出现血糖最低值，且持续3～5小时血糖不回升，血浆胰岛素含量增高。