大鼠肝内起始淋巴管超微结构观察
解剖学报 2000年第3期第31卷 论著
作者：赵玲辉?　李玉兰　张莉　张雅芳　张云芳　王云祥
单位：赵玲辉（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）；李玉兰（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）；张莉（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）；张雅芳（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）；张云芳（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）；王云祥（哈尔滨医科大学解剖学教研室，哈尔滨　150086）
关键词：起始淋巴管；超微结构；图像分析；肝；大鼠
　　【摘要】　目的　观察大鼠肝内起始淋巴管(毛细淋巴管)的超微结构特点，并测量有关数据资料，探讨肝淋巴生成途径。　方法　半薄切片光镜观察，超薄切片透射电镜观察，计算机图像分析。　结果　肝起始淋巴管内皮细胞中富含溶酶体和质膜小泡，小泡的数密度为39.80个／μm³，体密度为0.028。小泡的平均直径为90.6nm。内皮细胞连接有3种类型，端端连接占18.7%，重叠连接占46.0%，嵌插连接占34.0%，处于开放状态的占1.3%。内皮细胞连接处有特殊连接装置的占60.7%。　结论　研究结果提示肝淋巴生成可能以小泡转运为主要途径。观察大鼠肝内起始淋巴管(毛细淋巴管)的超微结构特点，并测量有关数据资料，探讨肝淋巴生成途径。　方法　半薄切片光镜观察，超薄切片透射电镜观察，计算机图像分析。　结果　肝起始淋巴管内皮细胞中富含溶酶体和质膜小泡，小泡的数密度为39.80个／μm³，体密度为0.028。小泡的平均直径为90.6nm。内皮细胞连接有3种类型，端端连接占18.7%，重叠连接占46.0%，嵌插连接占34.0%，处于开放状态的占1.3%。内皮细胞连接处有特殊连接装置的占60.7%。　结论　研究结果提示肝淋巴生成可能以小泡转运为主要途径。
[-hzh-] 　　【中图分类号】　R322.26　【文献标识码】　A　【文章编号】　0529-1356(2000)03-218
THE ULTRASTRUCTURE OF HEPATIC INITIAL
　　LYMPH VESSELS OF RAT
ZHAO Ling-hui，LI Yu-Lan,ZHANG Li，ZHANG Ya-fang　ZHANG Yun-fang, WAGN Yun-xiang
　　(Department of Anatomy, Harbin Medical University, Harbin　150086，China)
　　【Abstract】　Objective　　To study the pathway of lymph formation in liver, the ultrastructures of hepatic initial lymph vessels of rat were observed and the relative data were measured. Methods　The semithin sections were observed under light microscope, then the ultrathin sections were observed under transmission electron microscope and finally by means of computer image analysis system data were measured. Results　A lot of lysosome and vesicles existed in endothelia of hepatic initial lymph vessels. Profil density(39.8 vesicles／μm³), volume density(0.028) and average diameter(90.6nm) of vesicles were measured. The type and opening rate(1.3%) of interendothelial contacts were determined. The type of the interendothelial contacts was end-end(18.7%)， overlapping (46.0%) and interdigitating(34.0%) junction. The interendothelial contacts with special junctional complexes was 60.7% or so. Conclusion　The study showed that vesicles transport might be the main pathway of lymph formation in liver.
　　【Key words】　Initial lymph vessel; Ultrastructure; Liver; Rat
　　组织液及部分大分子物质进入淋巴管形成淋巴的途径有两条，即通过开放的内皮细胞连接和内皮细胞质中的小泡吞饮转运作用。在不同器官内淋巴生成的主要途径可能不同。如胃^［1］等器官是以开放的内皮细胞连接为主要转运途径，有的器官则可能以小泡转运为主要途径。那么肝的淋巴生成是以哪条途径为主，Niiro^［2］报道鼠肝淋巴生成途径是以小泡转运为主，Magari^［3］又认为是以内皮细胞连接开放为主要途径。因此，研究肝起始淋巴管内皮细胞超微结构的特点，尤其是获得相关数据资料，将成为认识肝淋巴生成途径的基础。
　　材料和方法
　　Wistar大鼠10只，雌雄不限，重200～300g。乙醚麻醉，常规手术开腹。每只动物随机取肝组织10块，立即入2.5%戊二醛内固定。按常规618树脂包埋。制半薄切片，光镜下观察，选出门管区有淋巴管的，再定位修块，作超薄切片，厚50～70nm，在透射电镜(日本产，H600)下观察。根据肝内起始淋巴管特征^［4］，确认起始淋巴管后摄片。任意抽取200张照片，经计算机图像分析系统(MagisvanⅡ, A Joyve Loebl公司，英国)测定内皮细胞中小泡的分布情况，数密度，体密度和内皮细胞连接的类型，开放率及特殊连接(桥粒，中间连接，紧密连接)装置等各项数据资料。
　　结　果
　　1.起始淋巴管的超微结构特征
　　肝起始淋巴管的腔较大，很不规则，由连续的单层内皮细胞围成，一般为2～3个，少见1个或4个以上内皮细胞围成的起始淋巴管。内皮细胞除核周区以外，其余部分的胞质都很薄，最小厚度平均为82nm。内皮细胞为连续型，无窗孔。内皮细胞外无基膜或有很少量断续的基膜，偶见于内皮细胞连接处。无周细胞。在内皮细胞与周围的胶原纤维之间有成簇存在的锚丝相连。内皮细胞核及其周围的胞质常向管腔内突出，当管腔塌陷时，核多呈扇贝状；而当管腔充盈扩张时，核多呈椭圆形。上述特征与毛细血管截然不同(图1，2)。
　　肝起始淋巴管内皮细胞中的细胞器较多并密集。大量的线粒体除分布在核周区较厚的胞质中外，即使在胞质很薄的边缘区也随处可见。胞质中有较其他器官淋巴管更为丰富的溶酶体，包括初级溶酶体和次级溶酶体(图3，4)。在核周区有中心粒，高尔基复合体和微管等。在整个胞浆内均可见到散在的核糖体和大量质膜小泡。
　　2.质膜小泡的形态和分布
　　肝起始淋巴管内皮细胞中有丰富的质膜小泡(图5)，多为圆形或椭圆形，大小不等，但以大的为多，其平均直径为90.6±3.2个／μm³。有时可见小泡融合形成的大泡，最大直径可达267nm。大多数小泡的壁都很薄称为无衣小泡，少数小泡的壁较厚，为有衣小泡。用计算机图像分析系统测量了40个起始淋巴管内皮细胞中的1 064个小泡，其数密度为39.8±3.0个／nm，体密度为0.028±0.002。小泡的分布形式有3种：多数小泡游离于细胞质内，占72.8%；少数贴近管腔面，包括已开口于管腔的，占18.1%；还有一些贴近外侧面细胞膜，包括向管腔外开口的，占9.1%。分布在核周区的小泡占41.4%，分布在胞质较薄处的小泡占53.3%，而在内皮细胞连接处的小泡则很少，仅占5.3%。
　　3.内皮细胞连接
　　肝起始淋巴管内皮细胞的连接形式与其他器官内的相同，也有3种类型，即端端连接、重叠连接和嵌插连接。我们观察150个内皮细胞连接点，以重叠连接为最多，占46.0%(69个)，其次为嵌插连接，占34.0%(51个)，端端连接最少，占18.7%(28个)。此外还见到两个开放连接，占1.3%。连接间隙的宽度分别为300nm和33nm(图6)。在重叠连接和嵌插连接中，常可见到相互重叠或交错的内皮细胞突起之间形成间隙(图7)，平均宽度为247.5nm，最宽的可达600nm。在各种连接类型中有特殊连接装置的占60.7%，其中以桥粒最多见(图8)，大多见于嵌插连接处，少数见于重叠连接。
　　讨　论
　　肝起始淋巴管内皮细胞的超微结构虽然与其他器官内的基本相同，但仍有其特点。始肝淋巴管内皮细胞中的溶酶体明显较其他器官的多，且常可见到次级溶酶体。Magari^［3］对多种动物肝淋巴管的观察，也发现其内皮细胞中的溶酶体较丰富。提示肝起始淋巴管内皮细胞也参与肝的防御机能，可能与枯否细胞一起构成肝内的一道防线。我们重点讨论肝起始淋巴管内皮细胞中的小泡系统和细胞连接。
　　我们对大鼠肝起始淋巴管内皮细胞小泡系统检测数据与Niiro,^［2］Albertine^［5］，O'Morchoe^［6］等对鼠肝、肾、甲状腺的测定数据及韩铭达等^［1］报告的鼠胃淋巴管的数据进行比较，详见表1。
　　由表1数据可见，肝、肾、甲状腺等实质性器官的淋巴管内皮细胞的小泡直径明显大于胃，其数密度和体密度也普遍较胃的高。提示肝、肾、甲状腺一类的实质性器官起始淋巴管的小泡系统是组织液和大分子物质转运的主要途径。
　　肝起始淋巴管内皮细胞的连接形式与其他器官的基本相同，即均有端端连接，重叠连接和嵌插连接3种类型，并且都以重叠连接形式最多。但在连接点的开放率和特殊连接装置的出现率方面则有很大差异，详见表2。
　　由表2提供的数据可见，肝、肾等实质性器官起始淋巴管内皮细胞连接的开放率明显比胃、肠等空腔性器官的低，而特殊连接装置的出现率在肝和肾却明显的高于胃和肠。这进一步提示，肝内组织液和大分子物质的转运不是以内皮细胞连接开放为主要途径的。许多学者认为器官内的淋巴生成主要有两条途径：一条是通过内皮细胞质的小泡系统转运，另一条是通过相邻内皮细胞之间的连接。本研究结果提示，不同器官的淋巴生成途径可能不同，肝和肾等实质性器官的淋巴生成可能以小泡转运为主要途径，而胃和肠等空腔性器官淋巴生成则是以内皮细胞连接的开放为主要转运途径。
表1　肝、肾、甲状腺、胃淋巴管内皮细胞小泡的分布和直径
　　Table 1　Distribution and diametor of endothelial vesicles of the lymphatics in liver, renal,thyroid gland and stomach

作者 　　author	器官 　　organs	平均最大直径 　　(nm)mean 　　maximum 　　diameter	数密度(μm3) 　　numerical 　　density	体密度 　　volume 　　density
赵玲辉 　　ZHAO 　　Ling-hui	肝 　　(liver)	90.6	39.8	0.028
Niiro	肝(liver)	80.0	74.6	0.035
Albertin	肾(renal)	69.4	31.7	0.060
O'Mor- 　　choe	甲状腺 　　(thyroid 　　gland)	90.6	57.2	0.067
韩铭达 　　(HAN 　　Ming-da)	胃 　　(stomach)	49.4	36.0	0.023

表2　内皮细胞连接的开放率和特殊连接装置的出现率
　　Table 2　The opening rate and the present rate of special
　　junction in intecellular contacts

作者 　　author	器官 　　organs	开放率(%) 　　opening 　　rate	特殊连接装置 　　出现率(%) 　　present ratespecial 　　junction
赵玲辉 　　(ZHAO 　　Ling-hui)	肝(liver)	1.30	60.70
Niiro	肝(liver)	0.40	65.00
Albertin	肾(renal)	1.30	74.50
韩铭达 　　(HAN 　　Ming-da)	胃 　　(stomach)	3.50	7.30
郑国宝［7］ 　　(ZHENG 　　Guo-bao)	小肠 　　(intestin)	22.93	35.67

图版说明
　　图1　示肝门管区起始淋巴管，内皮细胞核向腔内凸出，无基膜。标尺示1.0μm
2　示肝门管区的毛细血管　有基膜(↑)，有窗孔(▲)。标尺示0.5μm
3　示内皮细胞的初级溶酶体。标尺示0.5μm
4　示内皮细胞的次级溶酶体。标尺示0.5μm
5　示内皮细胞的小泡，有向管腔内的开口(?)。标尺示0.5μm
6　示开放型内皮细胞连接(?)标尺示0.5μm
7　示内皮细胞连接间的膨大，也称内皮细胞间通道(?)标尺示0.5μm
8　示伴有桥粒(↑)的重叠型内皮细胞连接　标尺示0.5μm
　　L：起始淋巴管　B：毛细血管　C：胶原纤维　N：内皮细胞核
Explanation of figures
　　Fig.1　Showing initial lymph vessel of portal region in liver. The endothelial nucleus project to cavity. There was no basement membrance. Bar=1.0μm
　　Fig.2　Showing blood capillary of portal region in the liver. There were basement membrance(↑) and hole appeared(▲). Bar=0.5μm
　　Fig.3　Showing primary lysosome in the endothelium.Bar=0.5μm
　　Fig.4　Showing secondary lysosome in the endothelium.Bar=0.5μm
　　Fig.5　Showing vesicle in the endothelium, some of them(?) opened toward cavity. Bar=0.5μm
　　Fig.6　showing the opening junction of the endothelium(?). Bar=0.5μm
　　Fig.7　Showing the expanding or intercellular channel of interendothelial contact(?). Bar=0.5μm
　　Fig.8　Showing overlapping junction with desmosome(↑). Bar=0.5μm
　　L,initial lymph vessel　　　　B,lymphatic capillary
　　C,collagen fiberN,endothelial nucleus
　　【基金项目】国家自然科学基金资助项目(39170405)
　　【作者简介】　赵玲辉(1943—)女，哈尔滨人，大学本科毕业，教授
　　通讯作者(To whom correspondence shouled be addressed)
参考文献
　　［1］韩铭达，王云祥，赵玲辉，等.大鼠胃壁内毛细淋巴管的超微结构［J］.解剖学报，1992，23(2)：129～132.
　　［2］Niiro GK, O'Morchoe CCC. An ultrastructural study of transport pathways across rat hepatic lymph vessels［J］. Lymphology,1985,18(2)：98-106.
　　［3］Magari S. Fujikawa K. and Nishi A. Form, fine structure and function of hepatic lymphatics with special refference to blood vessels and bile ducts［J］. Asian Med J, 1981,24(4):254-270.
　　［4］赵玲辉，李玉兰，张雅芳，等.兔、鼠肝起始淋巴管的分布及形态学测量［J］.解剖学报，1997，28(3)：248～251.
　　［5］Albertine HK, O'Morchoe CCC. Renal lymphatic ultrastructure and translymphatic transport［J］. Microvase Res,1980,19(3):338-346.
　　［6］O'Morchoe PJ. Lymphatic system of the thyroid gland in the rat［J］. Lymphology.1989.20(1):10-18.
　　［7］郑国宝，王云祥，高春芳.豚鼠小肠壁内毛细淋巴管的超微结构［J］.解剖学杂志，1998，21(1)：62～64.
【收稿日期】1999-07-09　【修稿日期】1999-12-24