处女膜闭锁最常见于初潮后发育正常的少女。在月经初潮年龄的少女中，典型的症状是闭经和周期性骨盆疼痛，提示继发于阴道梗阻的出血。处女膜闭锁通常在阴道检查时可见一个蓝色的鼓膜。如果有出血，腹部或直肠检查常可触及肿块。处女膜闭锁的诊断通常纯粹是基于体检，但如有必要，可通过经腹、经会阴或经直肠超声确诊。

处女膜闭锁也可以在新生儿中被诊断出来，而且在怀孕期间胎儿的超声波扫描中偶尔可以检测到。新生儿的诊断是基于腹部或盆腔肿块或隆起的处女膜。对正常新生儿阴道的检查通常显示在大阴唇后连合处有粘液痕迹；没有粘液可能表明处女膜闭锁或其他阴道阻塞。

当处女膜有许多微小的开口时，也会诊断出类似的情况，这种称为筛状处女膜。